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一、概述

海研智能程控定量封口機(jī)是由智能電路電驅(qū)動(dòng)，內(nèi)部專用加熱輥，專門用于51孔定量盤和 97 孔定量盤封膜作用，配合微生物檢測(cè)試劑使用，提供簡(jiǎn)單、快速、定量檢測(cè)總大腸菌群、大腸埃希氏菌、糞（耐熱）大腸菌群、腸球菌和綠膿假單胞菌的實(shí)驗(yàn)方案；51 孔定量盤和 97 孔定量盤是基于傳統(tǒng)方法可能數(shù) (MPN) 統(tǒng)計(jì)模型而設(shè)計(jì)的半自動(dòng)定量方法，可定量檢測(cè)出水樣結(jié)果，這種方法可以替代并優(yōu)于傳統(tǒng)（濾膜、及多管發(fā)酵）方法檢測(cè)水中微生物。

二、適用范圍:

用于水樣中的綠膿假單胞菌群、腸球菌、總大腸菌群和糞大腸桿菌、大腸埃希菌、菌落總數(shù)的快速檢測(cè)、可野外攜帶、應(yīng)急、定量檢測(cè)。

三、產(chǎn)品描述：

酶底物法檢測(cè)裝置由程控定量封口機(jī)、51 或 97 孔定量檢測(cè)盤、100mL定量瓶、酶底物法檢測(cè)試劑四部分組成，檢測(cè)水樣范圍:飲用水、源水、瓶裝水、中水、二次供水、管網(wǎng)水、廢水、食品水、畜牧用水、醫(yī)療用水等。

優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：

酶底物法為 GB5750-2006 及HJ1001-2018收錄的用于大腸桿菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，酶底物法是目前水中大腸桿菌檢測(cè)的不錯(cuò)方法，目前以其方便快捷，假陽(yáng)性低，適用大量樣品快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)正逐步被國(guó)內(nèi)檢測(cè)部門所認(rèn)可。

相對(duì)于多管發(fā)酵和濾膜法，酶底物法檢測(cè)步驟大大減少，而且對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求不高，檢測(cè)時(shí)間可減少到 24 小時(shí)，在日常水樣監(jiān)測(cè)及應(yīng)急監(jiān)測(cè)中具有很好的應(yīng)用前景，可及時(shí)檢測(cè)，預(yù)防，一定限度的減少重大公共安全事故的發(fā)生幾率。 以GB5750-2006 中總大腸菌群測(cè)定為例，比較三種方法，如表所示。

方法優(yōu)勢(shì)：

1.無(wú)需在無(wú)菌室內(nèi)操作。

2.手工操作時(shí)間小于 1 分鐘。

3.無(wú)需培養(yǎng)基制備和大量玻璃器皿滅菌。

4.24小時(shí)即可完成定性定量分析，無(wú)需驗(yàn)證試驗(yàn)。

技術(shù)參數(shù)

四、51孔和97定量盤操作說(shuō)明

51孔和97孔定量盤滅菌消毒

定量盤與酶底物法配合使用，定量檢測(cè)100ml水中微生物，將酶底物法試劑與檢測(cè)水樣混合后加入到51孔或者97孔定量盤中，使用程控定量封口機(jī)封膜，根據(jù)檢測(cè)不同項(xiàng)目的培養(yǎng)溫度和時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)（24H），數(shù)出顯陽(yáng)性的孔格，對(duì)照MPN表讀結(jié)果。

【工作原理】

加入含有總大腸菌群細(xì)菌的水樣，目標(biāo)細(xì)菌在Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中36℃±1℃培養(yǎng)，總大腸菌群細(xì)菌產(chǎn)生的特異性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的色源底物ONPG,使培養(yǎng)呈現(xiàn)黃色；同時(shí)水樣中大腸埃希氏菌產(chǎn)生特異性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的熒光底物MUG，產(chǎn)生特征性熒光。同樣原理，耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)在44.5℃培養(yǎng)時(shí)會(huì)分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的色源底物ONPG，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。

【使用方法】

①定性測(cè)試：

第一步、在100ml水樣中加入試劑，溶解，36℃±1℃培養(yǎng)24h；

第二步、結(jié)果判讀

無(wú)色=陰性

黃色=總大腸菌群陽(yáng)性

黃色+熒光=大腸埃希氏菌群陽(yáng)性

注：耐熱大腸群菌（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色為陽(yáng)性

②定量檢測(cè)

第一步、在100ml水樣中加入試劑，溶解；

第二步、倒入51孔定量檢測(cè)盤（定量孔板）或97孔定量檢測(cè)盤（定量孔板）中；

第三步、用程控定量封口機(jī)對(duì)定量檢測(cè)盤（定量孔板）進(jìn)行封膜，36 ℃±1℃培養(yǎng)24h；

第四步、定量檢測(cè)盤（定量孔板）結(jié)果判讀：

無(wú)色=陰性

黃色格子=總大腸菌群陽(yáng)性

黃色+熒光格子=大腸埃希氏菌群陽(yáng)性

查對(duì)照MPN表計(jì)數(shù)

注：耐熱大腸群菌（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色格子為陽(yáng)性結(jié)果，查對(duì)照MPN表計(jì)數(shù)。